Perpustakaan Digital ITB

Superoksida dismutase mangan Staphylococcus equorum rekombinan (rMnSODSeq) adalah enzim yang berperan dalam reaksi dismutasi radikal superoksida menjadi spesi oksigen yang lebih stabil. rMnSODSeq memiliki rentang stabilitas termal dan pH yang cukup luas namun aktivitasnya turun setengahnya setelah pemaparan UVC selama 45 menit. Berbagai upaya peningkatan stabilitas protein telah berhasil dilakukan namun menghasilkan protein yang aktivitasnya lebih rendah. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan stabilitas termal rMnSODSeq dengan tetap mempertahankan aktivitas spesifiknya. Peningkatan stabilitas dirancang melalui pembentukan interaksi tambahan pada antarmuka dimer protein yang tidak mengganggu pusat aktif dan bukan termasuk asam amino daerah lestari. Modifikasi melalui mutagenesis situs terarah dengan primer yang dirancang kemudian dilakukan. Plasmid mutan hasil mutagenesis pJExpress414_sod ditransformasi ke inang Escherichia coli TOP10 dan BL21(DE3) berlanjut dengan overproduksi, karakterisasi dan kristalisasi protein rMnSODSeq K38R-A121E dan K38R-A121Y. Berdasarkan pengujian stabilitas menggunakan Thermal Shift Assay (TSA), rMnSODSeq K38R-A121E tidak menunjukkan titik leleh dimer sehingga dihipotesiskan sebagai keberhasilan upaya peningkatan stabilitas sedangkan rMnSODSeq K38R-A121Y mengalami penurunan stabilitas monomer. Uji aktivitas menggunakan metode zimografi dan kolorimetri menunjukkan kesetaraan aktivitas antara rMnSODSeq alami dan mutan. Penelitian dilanjutkan dengan berfokus pada menentukan struktur tiga dimensi (3D) rMnSODSeq K38R-A121E dan K38R-A121Y serta mempelajari korelasi antara struktur dan stabilitas.