Perpustakaan Digital ITB

Asam ursodeoksikolat (UDCA) merupakan salah satu asam empedu sekunder yang dikonversi dari kolesterol pada hepatosit. UDCA digunakan untuk pengobatan Primary Billier Cirrhosis (PBC) dan secara umum telah diaplikasikan untuk pengobatan berbagai penyakit hati. Gen sitokrom P450 7A1 (CYP7A1) mengkode enzim 7?-hidroksilase kolesterol yang berperan dalam langkah awal biosintesis UDCA dari kolesterol melalui jalur klasik. Penyisipan gen CYP7A1 ke dalam tanaman yang mengandung kolesterol dapat dimediasi oleh Agrobacterium tumefaciens. Penelitian ini bertujuan untuk mentransformasi gen CYP7A1 ke A. tumefaciens dan menganalisis hasil konversi kolesterol dari gen tersebut dengan menggunakan teknik transformasi transien pada tanaman Nicotiana tabacum. Pembuatan sel elektrokompeten menggunakan A. tumefaciens strain LBA4404. Gen CYP7A1 yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari penelitian sebelumnya yang diisolasi dari ayam. Gen CYP7A1 dikloning ke vektor pGEM-T EASY dan telah dikonfirmasi melalui sekuensing lalu dikloning ke vektor ekspresi pCAMBIA1303 menggunakan enzim restriksi, BglII dan SpeI. Transformasi plasmid pCAMBIA1303 dan pCAMBIA-CYP7A1 ke A. tumefaciens dengan elektroporasi menggunakan Gene pulser Xcell. Konfirmasi hasil transformasi dianalisis dengan PCR menggunakan primer CaMV35S dan GUS. Bibit N. tabacum kultivar SR1 ditumbuhkan pada media MS0 padat. Transformasi transien menggunakan A. tumefaciens yang mengandung pCAMBIA1303 dan pCAMBIA- CYP7A1 pada medium MS yang ditambahkan asetosiringon dan silwet S-408. Transformasi ini menggunakan eksplan daun daerah meristem apikal tanaman N. tabacum. Konfirmasi keberhasilan transformasi transien dengan uji histokimia GUS. Hasil transformasi plasmid ke A. tumefaciens LBA4404 yang berisi pCAMBIA1303 dan pCAMBIA1303-CYP7A1 berhasil dengan adanya koloni yang tumbuh pada media seleksi dan hasil elektroforesis yang menghasilkan pita berukuran masing-masing sekitar 641 pb dan 2100 pb. Kultur N. tabacum berhasil di subkultur dan tembakau yang digunakan untuk transformasi transien adalah yang berumur 8 minggu. Pengujian histologi GUS telah dilakukan sekali namun belum berhasil karena tidak ditemukan adanya spot biru pada eksplan tembakau. Kesimpulan: Plasmid pCAMBIA1303 dan pCAMBIA-CYP7A1 berhasil ditransformasikan ke A. tumefaciens LBA4404 namun A. tumefaciens LBA4404 berisi pCAMBIA1303 dan pCAMBIA1303-cyp7A1 belum berhasil ditransformasikan ke N. tabacum yang menandakan plasmid atau gen belum berhasil disisipkan. Penelitian dilanjutkan tetapi terkendala penutupan akses laboratorium akibat wabah Covid-19 sehingga dilakukan kajian literatur (review) untuk melengkapi data penelitian. Pada kajian pustaka ini telah berhasil dikumpulkan dan dianalisis sebanyak 56 literatur.