Article Details

PENGEMBANGAN METODE INDIRECT SANDWICH ELISA UNTUK PENETAPAN KADAR DARBEPOETIN REKOMBINAN

Oleh   Arfa Izzati [20718006]
Kontributor / Dosen Pembimbing : Prof. Marlia Singgih, Ph.D.;Prof. Dr. Tutus Gusdinar Kartawinata, MS;Dr. Neni Nurainy;
Jenis Koleksi : S2 - Tesis
Penerbit : SF - Farmasi
Fakultas : Sekolah Farmasi (SF)
Subjek :
Kata Kunci : darbepoetin, coating antibodi, validasi, indirect-sandwich ELISA inhouse.
Sumber :
Staf Input/Edit : yana mulyana  
File : 1 file
Tanggal Input : 2020-09-29 13:32:18

Darbepoetin (DPO) merupakan hormon glikoprotein berperan dalam eritropoiesis dengan cara menstimulasi colony forming unit eritroid (CFU-E) dan menghasilkan eritrosit. DPO memiliki 5 N-linked chains dan 1 O-linked chain dengan total asam sialat maksimum sebanyak 22 molekul. Penambahan 2 N-linked chains menghasilkan peningkatan waktu paruh dan aktivitas biologi in vivo dibandingkan dengan generasi sebelumnya. Deteksi konsentrasi DPO menggunakan ELISA sebelumnya telah dilakukan menggunakan kit komersial namun biaya kit komersil cukup mahal sehingga perlu dilakukan pengembangan dan validasi metode analisis indirect-sandwich ELISA in-house untuk penentuan kadar DPO hasil produksi sel Chinese Hamster Ovary (CHO) skala riset dan pengembangan untuk mendapatkan metode yang lebih ekonomis. Hasil optimal coating antibodi pada pengenceran 1:6000. Seluruh parameter validasi memenuhi persyaratan yang berlaku dimana rentang linear 2.29-73.40 µg/mL dengan koefisien korelasi (R)=0.9959. Akurasi yang didapatkan dalam rentang 100- 103%. Presisi intra-day dan inter-day adalah 0.46-8.44% dan 3.44-9.33%. LOD dan LOQ berturut-turut 0.2767 µg/mL dan 0.9224 µg/mL. Analisis biaya menunjukkan bahwa metode ELISA in-house lebih ekonomis dibandingkan dengan kit ELISA komersial yang tersedia.