Perpustakaan Digital ITB

Pada suhu lingkungan yang tinggi, protein dapat mengalami denaturasi dan agregasi. Suhu tinggi juga mengganggu kestabilan membran sel dan kecepatan metabolisme bakteri. Salah satu cara bakteri untuk menghindari cekaman suhu adalah dengan mensintesis protein Elongation Factor-Tu (EF-Tu). Protein EF-Tu merupakan protein multifungsi yang berperan dalam sintesis protein dan respon terhadap cekaman lingkungan (molecular chaperone). Tujuan dari penelitian ini adalah mengisolasi gen penyandi protein EF-Tu (gen tuf) bakteri termofilik (Brevibacillus borstelensis) dan mengkarakterisasi gen tersebut. Isolat bakteri diidentifikasi spesiesnya secara molekuler menggunakan fragmen 16S rRNA dan menunjukkan kesamaan sekitar 99% dengan Brevibacillus borstelensis. Gen tuf diisolasi menggunakan metode crude PCR, dikloning menggunakan plasmid pGEM-T Easy, dan disubkloning pada plasmid pET32-b yang diekspresikan menggunakan E.coli BL21 (DE3). Gen tuf berhasil diamplifikasi dengan ukuran 1191 pb dan protein EF-Tu berhasil diekspresikan dengan induksi IPTG dengan larik berukuran ~60 kDa pada SDS-PAGE. Percobaan selanjutnya yaitu mengamati pola pertumbuhan E.coli BL21 (DE3) yang mengandung plasmid ekspresi rekombinan pET-tuf pada suhu 37oC, 45oC, 50oC, dan 55oC dengan kontrol E.coli BL21 (DE3) wild type dan E.coli BL21 (DE3) yang mengandung pET32b tanpa sisipan. Uji viabilitas memperlihatkan bahwa E. coli transforman dengan induksi IPTG yang dipapar pada suhu 55oC selama dua jam memiliki jumlah persentase viabilitas sel yang lebih tinggi dibandingkan transforman tanpa induksi IPTG dan kontrol. Hasil ini mengindikasikan bahwa protein EF-Tu dapat meningkatkan viabilitas E.coli BL21 (DE3) pada suhu tinggi.