Perpustakaan Digital ITB

Tuberkulosis (TB) merupakan penyakit mematikan yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis. Hingga saat ini, vaksin yang efektif untuk penyakit TB belum ditemukan sehingga banyak penelitian diarahkan untuk mendapatkan vaksin TB baru. Salah satu kandidat vaksin TB adalah antigen 85 (Ag85), yang terdiri atas Ag85A, Ag85B dan Ag85C. Protein Ag85B terlibat dalam proses transfer asam mikolat dari sitosol ke dinding sel. Ag85B juga memiliki fungsi imunologi karena dapat menginduksi poliferasi T-sel dan sekresi IFN-γ pada individu yang terekspos M. tuberculosis. Tujuan penelitian ini adalah mendisain konstruksi gen pengode Ag85B dan mengekspresikan gen tersebut di dalam sel Escherichia coli BL21(DE3). Untuk mencapai tujuan penelitian tersebut, gen pengode Ag85B dikonstruksi melalui penggabungan dua gen, yaitu gen pengode Ag85B dan gen pengode maltose binding protein (MBP) pada vektor ekspresi pMAL-c5x. Gen pengode Ag85B diperoleh dengan metode Polymerase Chain Reaction (PCR) dan hasilnya divisualisasikan dengan elektroforesis gel agarosa berupa pita berukuran sekitar 900 bp. Gen ini juga telah berhasil dikloning menggunakan vektor kloning pGEM-T dengan hasil berupa pita DNA berukuran 3,9 kb. Hasil subkloning gen pengode Ag85B ke dalam vektor ekspresi pMAL-c5x adalah DNA rekombinan pMAL-Ag85B. Ekspresi pMAL-Ag85B di dalam sel Escherichia coli BL21(DE3) menunjukkan adanya pita berukuran sekitar 70 kDa pada Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrilamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE). Protein 70 kDa tersebut merupakan protein fusi antara Ag85B yang berukuran 30 kDa dan MBP yang berukuran 42,5 kDa.