Article Details

PEMURNIAN DAN KARAKTERISASI ENZIM PGA INTRASEL DARI Bacillus sp. BAC4

Oleh   SYAIFUL BAHRI
Kontributor / Dosen Pembimbing :
Jenis Koleksi : Anggota
Penerbit :
Fakultas :
Subjek :
Kata Kunci : Bacillus sp;6-aminopencillanic acid
Sumber :
Staf Input/Edit :  
File : 1 file
Tanggal Input : 2004-03-04 15:36:00

Bacillus sp. BAC4 telah diidentifikasi sebagai suatu strain lokal yang menghasilkan penisilin G asilase (PGA). Enzim ini menghidrolisis benzil penisilin menghasilkan asam 6-aminopenisilanat dan asam fenil asetat. Asam 6-aminopenisilanat merupakan suatu bahan baku bagi sintesa berbagai antibiotik turunan R-laktam. Dari penelitian terdahulu diketahui bahwa Bacillus sp. BAC4 menghasilkan PGA ekstrasel dan PGA intrasel. PGA ekstrasel telah banyak dipelajari, tetapi pengetahuan tentang PGA intrasel masih sangat minim. Untuk mengetahui sifat-sifat PGA intrasel Bacillus sp. BAC4 maka dilakukan pemumian dan karakterisasi terhadap PGA intrasel tersebut. Pemumian PGA intrasel dilakukan dengan pemecahan sel bakteri secara sonikasi. Filtrat yang mengandung asilase dipisahkan dari debris sel dengan cara sentrifugasi. Filtrat kemudian difraksinasi dengan 80 % (b/v) amonium sulfat, didialisis dalam tabung selovan dan difraksinasi lebih lanjut dengan kromatografi afinitas ligan fenil asetat. Dari proses ini dihasilkan tiga fraksi, dimana dua fraksi menunjukkan aktivitas protease dan satu traksi menunjukkan aktivitas asilase. Fraksi asilase ini memiliki kadar protein sekitar 32,5 mg dengan aktivitas spesifik sebesar 0,29 unit/mg. Karakterisasi dengan SDS-PAGE menunjukkan bahwa PGA intrasel ini memiliki dua sub unit masing-masing dengan berat molekul sekitar 35 kD dan 47 kD. Data ini adalah sesuai dengan PGA intrasel dari E. coli, K. cilrophilia, A. viscocus dan l'. religeri yang juga terdiri atas dua sub unit dengan berat molekul total sekitar 80 W. Meskipun demikian, data ini tidak sesuai dengan yang diharapkan, karena enzim PGA ekstrasel Bacillus sp. BAC4 memiliki berat molekul total sekitar 130 kD. Nampaknya PGA intrasel dan PGA ekstrasel Bacillus sp. BAC4 adalah dua molekul protein yang berbeda dan tidak saling berhubungan.