digilib@itb.ac.id +62 812 2508 8800

ABSTRAK Naomi Dwi Cahyanti
PUBLIC yana mulyana

Pada penelitian sebelumnya telah berhasil diisolasi gen pengkode kandidat protease dari simbion (Bacillus velezensis) spons air tawar (Eunapius carteri), menggunakan degenarated primer. Hasil analisis sekuensing gen tersebut identik dengan peptidase serin S8 B. velezensis berdasarkan database NCBI. Gen kandidat protease dikloning ke pET16b dan diproduksi secara rekombinan pada Escherichia coli dengan induksi IPTG. Tujuan dari penelitian ini adalah mendapatkan kondisi optimum overproduksi kandidat protease rekombinan, dan menguji aktivitas protease serta kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan beberapa patogen. Overproduksi protease pada E. coli BL21(DE3), E. coli BL21- Gold(DE3), E. coli BL21-Codonplus(DE3)-RIPL pada 37 ?C dan 20 ?C menunjukkan bahwa protease diproduksi secara dominan pada bentuk tidak terlarutnya. Optimasi overproduksi menggunakan sistem chaperone GroES/ELTF pada inang E. coli BL21(DE3) pada 20 ?C dengan induksi tetrasiklin 10 ng/ml dan IPTG 0,01 mM menunjukkan peningkatan kelarutan protease Full sebesar 13,53% ± 2,04 dan Half 36,39% ± 8,96. Crude protein terlarut intrasel dari overproduksi menggunakan sistem chaperone GroES/EL-TF diuji aktivitas proteasenya dalam media kaseinolitik dengan proteinase K sebagai kontrol positif. Berdasarkan uji ini diketahui bahwa protein rekombinan memiliki aktivitas protease dengan terbentuknya zona bening di sekitar cakram. Uji aktivitas daya hambat pertumbuhan patogen menunjukkan bahwa protease rekombinan memiliki potensi dalam menghambat pertumbuhan Methicilin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) lebih besar dari E. coli ESBL. Aktivitas protease diduga terjadi karena mekanisme triad katalitik sesuai dengan situs aktif yang terdapat dalam peptidase serin S8 di B. velezensis.