Pada penelitian sebelumnya telah berhasil diisolasi gen pengkode kandidat
protease dari simbion (Bacillus velezensis) spons air tawar (Eunapius carteri),
menggunakan degenarated primer. Hasil analisis sekuensing gen tersebut identik
dengan peptidase serin S8 B. velezensis berdasarkan database NCBI. Gen kandidat
protease dikloning ke pET16b dan diproduksi secara rekombinan pada
Escherichia coli dengan induksi IPTG. Tujuan dari penelitian ini adalah
mendapatkan kondisi optimum overproduksi kandidat protease rekombinan, dan
menguji aktivitas protease serta kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan
beberapa patogen. Overproduksi protease pada E. coli BL21(DE3), E. coli BL21-
Gold(DE3), E. coli BL21-Codonplus(DE3)-RIPL pada 37 ?C dan 20 ?C
menunjukkan bahwa protease diproduksi secara dominan pada bentuk tidak
terlarutnya. Optimasi overproduksi menggunakan sistem chaperone GroES/ELTF
pada inang E. coli BL21(DE3) pada 20 ?C dengan induksi tetrasiklin 10 ng/ml
dan IPTG 0,01 mM menunjukkan peningkatan kelarutan protease Full sebesar
13,53% ± 2,04 dan Half 36,39% ± 8,96. Crude protein terlarut intrasel dari
overproduksi menggunakan sistem chaperone GroES/EL-TF diuji aktivitas
proteasenya dalam media kaseinolitik dengan proteinase K sebagai kontrol positif.
Berdasarkan uji ini diketahui bahwa protein rekombinan memiliki aktivitas
protease dengan terbentuknya zona bening di sekitar cakram. Uji aktivitas daya
hambat pertumbuhan patogen menunjukkan bahwa protease rekombinan memiliki
potensi dalam menghambat pertumbuhan Methicilin Resistant Staphylococcus
aureus (MRSA) lebih besar dari E. coli ESBL. Aktivitas protease diduga terjadi
karena mekanisme triad katalitik sesuai dengan situs aktif yang terdapat dalam
peptidase serin S8 di B. velezensis.