Tesis ini membahas pengembangan metode analisis laktosa dalam susu formula menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dengan detektor indeks refraksi. Penelitian ini bertujuan untuk menguji dan mengembangkan prosedur preparasi sampel yang akurat untuk penetapan kadar laktosa. Tiga prosedur preparasi sampel dievaluasi, dan hasilnya menunjukkan bahwa prosedur preparasi III memberikan hasil yang paling akurat. Metode KCKT yang dikembangkan dengan kondisi optimal, seperti fase gerak asetonitril-air (65:35) dan kolom NH2, menunjukkan linieritas, presisi, dan akurasi yang baik. Aplikasi metode ini pada sampel susu formula komersial menunjukkan hasil kadar laktosa yang terukur.