Teks tersebut menjelaskan secara rinci metode penelitian untuk mengekspresikan, memurnikan, dan menguji aktivitas enzim MMLV-RT fusi. Secara garis besar, penelitian ini melibatkan:
1. **Kloning dan Transformasi:** Kloning plasmid target ke *E. coli* DH5α, diikuti transformasi ke *E. coli* BL21(DE3) untuk ekspresi protein.
2. **Optimasi Ekspresi:** Variasi suhu, durasi, dan konsentrasi IPTG untuk mendapatkan kondisi ekspresi protein MMLV-RT fusi yang optimal.
3. **Perbanyakan Kultur:** Perbanyakan volume kultur untuk mendapatkan jumlah protein yang lebih banyak.
4. **Optimasi Purifikasi:** Penggunaan dua jenis buffer (berbasis PBS dan deterjen) untuk optimasi purifikasi protein MMLV-RT fusi menggunakan kolom Ni-NTA.
5. **Optimasi Buffer Uji Aktivitas:** Penggunaan dua jenis buffer (berbasis PBS dan deterjen) untuk optimasi buffer uji aktivitas enzim.
6. **Konfirmasi dan Pengukuran:** Konfirmasi keberadaan protein target dengan SDS-PAGE dan Western blot, serta pengukuran konsentrasi protein menggunakan metode Bradford.
7. **Uji Aktivitas:** Penentuan aktivitas transkripsi balik MMLV-RT fusi dan buffer terbaik untuk purifikasi dan uji aktivitas menggunakan RT-qPCR.
Teks juga menjabarkan alat dan bahan yang digunakan, serta prosedur detail untuk setiap tahapan penelitian, termasuk pembuatan sel kompeten, transformasi, isolasi plasmid, koloni PCR, sekuensing, lisis sel, purifikasi protein, pengujian aktivitas enzim, dan analisis data.
