18 Bab III Metode Penelitian Pada penelitian ini dilakukan identifikasi isolat LT1B dan PT2B dengan metode konvensional, produksi serta karakterisasi enzim CGTase yang dimurnikan secara parsial dari kedua isolat. Identifikasi isolat secara konvensional dilakukan untuk mengkonfirmasi kedua isolat sebagai anggota genus Bacillus. Uji yang dilakukan meliputi uji pewarnaan sederhana dan spora serta beberapa uji biokimia (uji fermentasi gula, IMVIC dan produksi H2S). Produksi CGTase yang dimurnikan secara parsial dari kedua isolat dilakukan melalui beberapa tahap. Produksi dimulai dari pemekatan supernatan kultur kedua isolat yang berusia 48 jam dengan freeze dryer, presipitasi protein menggunakan amonium sulfat hingga 76,9% saturasi, dialisis hasil resuspensi presipitat serta pemekatan akhir dengan Nanosep ® cut off 10 kDa. Fraksi yang diperoleh dari hasil pemekatan dengan Nanosep ® selanjutnya dinamakan enzim CGTase yang dimurnikan secara parsial. Karakterisasi enzimatik dilakukan terhadap CGTase yang dimurnikan secara parsial meliputi uji zimografi pada gel PAGE-natif, penentuan bobot molekul dengan SDS PAGE, uji untuk mengetahui pengaruh suhu dan pH terhadap aktivitas dan stabilitas enzim, analisis spesifisitas produk siklisasi yang dihasilkan, serta penentuan waktu reaksi optimum untuk produksi CD-β. Dari hasil karakterisasi yang dilakukan, selanjutnya dilakukan analisis data dan penarikan kesimpulan..