KARAKTERISASI ENZIMATIK SIKLODEKSTRIN GLIKOSILTRANSFERASE (CGTase) YANG DIMURNIKAN SECARA PARSIAL DARI Bacillussp. LT1B DAN PT2B ASAL INDONESIA TESIS Karya tulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister dari /ŶƐƟƚƵƚdĞŬŶŽůŽŐŝĂŶĚƵŶŐ Oleh NUR MIFTAHURROHMAH NIM : 20710021 (Program Studi Farmasi) INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2012 KARAKTERISASI ENZIMATIK SIKLODEKSTRIN GLIKOSILTRANSFERASE (CGTase) YANG DIMURNIKAN SECARA PARSIAL DARI Bacillussp. LT1B DAN PT2B ASAL INDONESIA Oleh NUR MIFTAHURROHMAH NIM : 20710021 (Program Studi Farmasi) /ŶƐƟƚƵƚ dĞŬŶŽůŽŐŝ BĂŶĚƵŶŐ Menyetujui Tim Pembimbing Tanggal 22 Maret 2012 Pembimbing I Pembimbing II (Dr. rer. nat. Catur Riani) (Debbie Sofie Retnoningrum, Ph. D.) i ABSTRAK KARAKTERISASI ENZIMATIK SIKLODEKSTRIN GLIKOSILTRANSFERASE (CGTase) YANG DIMURNIKAN SECARA PARSIAL DARI ISOLATBacillussp. LT1B DAN PT2B ASAL INDONESIA Oleh EƵƌ DŝŌĂŚƵƌƌŽŚŵĂŚ NIM : 20710021 (Program Studi Farmasi) Siklodestringlikosiltransferase (CGTase, EC 2. 4. 2. 19) adalah enzim ekstrasel ƵŶƚƵŬ ďŝŽŬŽŶǀĞƌƐŝ ƉĂƟ ŵĞŶũĂĚŝ ŽůŝŐŽƐĂŬĂƌŝĚĂ ƐŝŬůŝŬ͕ ƐŝŬůŽĚĞŬƐƚƌŝŶ ;CDͿ͘ ^ĞŶLJĂǁĂ CD banyak digunakan dalam industri farmasi khususnya sebagai eksipien dalam formulasi sediaan obat. Pada peŶĞůŝƟĂŶ ƚĞƌĚĂŚƵůƵ͕ ƚĞůĂŚ ĚŝƐĞůĞŬƐŝ ĚƵĂ ŝƐŽůĂƚ ĂƐůŝ Indonesia penghasil CGTase (LT1B dan PT2B) di Laboratorium Bioteknologi &ĂƌŵĂƐŝ͕ ^ĞŬŽůĂŚ &ĂƌŵĂƐŝ /dB͘ <ĞĚƵĂ ŝƐŽůĂƚ ƚĞƌƐĞďƵƚ ĚŝŝĚĞŶƟĮŬĂƐŝ ƐĞĐĂƌĂ molekuler menggunakan 16S rDNA sebagai anggota genusBacillus. Pada ƉĞŶĞůŝƟĂŶ ŝŶŝ ĚŝůĂŬƵŬĂŶ ŬŽŶĮƌŵĂƐŝ ŐĞŶƵƐ ĚĞŶŐĂŶ ďĞďĞƌĂƉĂ Ƶũŝ ŬŽŶǀĞŶƐŝŽŶĂů͘ ,ĂƐŝů Ƶũŝ ĨĞƌŵĞŶƚĂƐŝ ŐůƵŬŽƐĂ LJĂŶŐ ƉŽƐŝƟĨ ĚĂŶ ĂĚĂŶLJĂ ƉĞŵďĞŶƚƵŬĂŶ ĞŶĚŽƐƉŽƌĂ ƉĂĚĂ kondisi ekstrim memperkuat karakter kedua isolat sebagai anggota dari genus Bacillus. Produksi CGTase yang dimurnikan secara parsial berhasil dikembangkan ŵĞůĂůƵŝ ďĞďĞƌĂƉĂ ƚĂŚĂƉ ŵĞůŝƉƵƟ ƉĞŵĞŬĂƚĂŶ ƐƵƉĞƌŶĂƚĂŶ ŬƵůƚƵƌ ŬĞĚƵĂ ŝƐŽůĂƚ berusia 48 jam denganfreeze dryer,presipitasi ammonium sulfat hingga saturasi 76,9%, dialisis dan pemekatan akhir dengan Nanosep ® (cut off 10 kDa). Enzim CGTase hasil pemurnian secara parsial dari isolat LT1B dan PT2B memiliki bobot molekul berturut-turut sebesar 80 dan 82 kDa serta memberikan hasil uji njŝŵŽŐƌĂĮ LJĂŶŐ ƉŽƐŝƟĨ ƵŶƚƵŬ ĂŬƟǀŝƚĂƐ ŚŝĚƌŽůŝƐŝƐ ƉĂƟ ĚĂŶ ƐŝŬůŝƐĂƐŝ-β.AŬƟǀŝƚĂƐ siklisasi-βLJĂŶŐ ŽƉƟŵƵŵ ƵŶƚƵŬ ŬĞĚƵĂ ĞŶnjŝŵ ƚĞƌũĂĚŝ ƉĂĚĂ ƐƵŚƵ ϲϬ ΣC ĚĂŶ Ɖ, ϴ͘ Kedua enzim stabil pada rentang pH 7-10 dan mempertahankan separuh ĂŬƟǀŝƚĂƐŶLJĂ ƐĞƚĞůĂŚ ŝŶŬƵďĂƐŝ ƐĞůĂŵĂ ϯϬ ŵĞŶŝƚ ƉĂĚĂ ϲϲ͕ϰϴ ΣC ƵŶƚƵŬ >dϭB ĚĂŶ 54,99 °C untuk PT2B. Spesifisitas produk siklisasi CGTase dari kedua isolat dianalisis menggunakan KCKT dengan detektor indeks refraksi, kolom NH2Waters Spherisorb ® , fase gerak asetonitril : air (70:30) dan laju alir 1,0 mL/menit. Hasil analisis menunjukkan kedua enzim menghasilkan CD-βsebagai produk yang paling dominan dibandingkan dengan CD-γ, sementara CD-αƟĚĂŬ ƚĞƌĚĞƚĞŬƐŝ͘ Produksi CD-βƚĞƌƟŶŐŐŝ ŬĞĚƵĂ ĞŶnjŝŵ Ěŝcapai setelah 24 jam reaksi pada suhu dan Ɖ, ŽƉƟŵƵŵŶLJĂ͘ Kata kunci: siklodekstrin glikosiltransferase, siklodekstrin,Bacillusisolat /ŶĚŽŶĞƐŝĂ͕ ŬĂƌĂŬƚĞƌŝƐĂƐŝ ĞŶnjŝŵĂƟŬ͘ ii ABSTRACT ENZYMATIC CHARACTERIZATION OF PARTIALLY PURIFIED CYCLODEXTRIN GLYCOSYLTRANSFERASE (CGTase) OFBacillussp. LT1B AND PT2B FROM INDONESIA by EƵƌ DŝŌĂŚƵƌƌŽŚŵĂŚ NIM :20710021 (School of Pharmacy) Cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase, EC 2. 4. 2.