PENGEMBANGAN STABLE CELL LINE AD293-lacI MENGGUNAKAN LENTIVIRUS UNTUK PRODUKSI VAKSIN BERBASIS ADENOVIRUS TESIS Karya tulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister dari Institut Teknologi Bandung Oleh AFINNA NURFITRI ANNANDARI NIM: 20722018 (Program Studi Magister Farmasi) INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG Agustus 2024 i ABSTRAK PENGEMBANGAN STABLE CELL LINE AD293-lacI MENGGUNAKAN LENTIVIRUS UNTUK PRODUKSI VAKSIN BERBASIS ADENOVIRUS Oleh Afinna Nurfitri Annandari NIM: 20722018 (Program Studi Magister Farmasi) Sel AD293 adalah satu sel inang mamalia untuk produksi vaksin berbasis adenovirus. Produksi adenovirus sebagai vektor untuk vaksin dapat terganggu oleh ekspresi gen pengkode protein vaksin. Sistem Lac merupakan salah satu sistem regulasi transkripsi yang dapat digunakan untuk inhibisi ekspresi protein pada sel inang untuk meningkatkan produksi adenovirus. Penelitian ini bertujuan mengonstruksi sel AD293-lacI yang stabil untuk produksi vaksin berbasis vektor adenovirus dengan sistem regulasi operon lac. Sel AD293-lacI dikonstruksi dengan cara menginfeksikan lentivirus yang membawa gen pengkode protein lacI pada sel AD293. Sel hasil infeksi diseleksi dengan media puromisin 1 μg/mL selama 12 hari. Sel hasil seleksi berhasil tumbuh dan diperbanyak, sementara kontrol negatif tereliminasi di media seleksi. Sel AD293-lacI yang berhasil dikonstruksi digunakan untuk produksi adenovirus AdV_Spike dan AdV_LacO_Spike, mengunakan sel AD293 dan AD293-lacI (transient) sebagai pembanding. Titer adenovirus AdV_Spike dan AdV_LacO_Spike pada sel AD293 adalah 8,9 × 10 7 dan 7,3× 10 7 IFU/mL. Titer adenovirus AdV_Spike dan AdV_LacO_Spike pada sel AD293-lacI adalah 1,3 × 10 7 dan 1,2 × 10 7 IFU/mL, sementara pada sel AD293-lacI (transient) adalah 1,2 × 10 6 dan 2,5 × 10 6 IFU/mL. Hasil deteksi ekspresi protein Spike pada sel AD293-lacI menunjukkan bahwa regulasi Sistem Lac untuk menginhibisi ekspresi protein Spike belum berjalan. Meskipun sel AD293-lacI yang dikonstruksi menggunakan vektor lentivirus berhasil ditumbuhkan dan diperbanyak di media seleksi puromisin, namun ekspresi protein lacI perlu dianalisa lebih lanjut. Kata kunci: adenovirus, lentivirus, regulasi ekspresi gen, operon lac ii ABSTRACT CONSTRUCTION OF AD293 -lacI STABLE CELL LINE USING LENTIVIRUS FOR ADENOVIRUS -BASED VACCINE PRODUCTION By Afinna Nurfitri Annandari NIM: 20722018 (Master’s Program in Pharmacy) AD293 cells are a mammalian host cell line used for the production of adenovirus- based vaccines. Production of adenovirus as a vector for vaccines can be suppresed by the expression of vaccine protein coding genes. The Lac system is a transcriptional regulatory system that can be used to inhibit transgene protein expression in host cells. This research aims to construct AD293-lacI stable cell line for the production of adenovirus vector-based vaccines with the lac operon regulatory system. AD293-lacI cells were constructed by infection of lentivirus carrying lacI into AD293 cells. Transduced cells were selected with medium containing 1 μg/mL puromycin for 12 days. Selected cells were further propagated, meanwhile the negative control was eliminated in the selection medium. The AD293-lacI cells were further used for the AdV_Spike and AdV_LacO_Spike production, using AD293 and AD293-lacI cells (transient) as controls.