STUDI PENDAHULUAN PENGEMBANGAN SPEKTROFOTOMETRI UV -VISIBLE BERBASIS REAKSI ENZIMATIK PEROKSIDASE LOBAK PUTIH ( Raphanus sativus L.) UNTUK ANALISIS OBAT TESIS Karya tulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister dari Institut Teknologi Bandung Oleh SHERIN ANINDHIA MAHARANI NIM: 20721308 (Program Studi Magister Farmasi) INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG AGUSTUS 2024 i ABSTRAK STUDI PENDAHULUAN PENGEMBANGAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VISIBLE BERBASIS REAKSI ENZIMATIK PEROKSIDASE LOBAK PUTIH ( Raphanus sativus L.) UNTUK ANALISIS OBAT Oleh Sherin Anindhia Maharani NIM: 20721308 (Program Studi Magister Farmasi) Analisis obat memainkan peran penting dalam kontrol kualitas dan pemastian mutu. Spektrofotometri adalah metode yang umum untuk mengidentifikasi dan mengukur senyawa dalam suatu analisis. Adanya kromofor dalam senyawa merupakan syarat analisis menggunakan metode spektrofotometri. Derivatisasi dengan reaksi enzimatik peroksidase merupakan metode yang dapat digunakan untuk memodifikasi senyawa tanpa kromofor. Salah satunya adalah oksidasi golongan fenol oleh hidrogen peroksida (H2O2) dengan keberadaan 4 - aminoantipirin (4- AAP) yang dikatalisis oleh enzim peroksidase menghasilkan suatu kuinonimin membentuk suatu produk berwarna. Tujuan penelitian untuk mengembangkan reaksi enzimatik peroksidase tersebut untuk analisis senyawa obat yang mengandung gugus fenol. Penelitian ini diawali dengan pemilihan senyawa obat dalam Farmakope Indonesia Edisi VI yang mengandung gugus fenol berdasarkan kriteria Emerson, kemudian dilanjutkan dengan penyiapan larutan enzim peroksidase dari lobak putih (Raphanus sativus L.), dan studi reaksi enzimatik dari senyawa obat terpilih. Hasil dari pemilihan senyawa obat yang mengandung fenol dalam Farmakope Indonesia Edisi VI diperoleh 20 senyawa obat yang sesuai dengan kriteria Emerson. Hasil isolasi enzim peroksidase dari lobak putih (Raphanus sativus L.) yang dilakukan menggunakan kombinasi metode homogenisasi, sonikasi, penyaringan, sentrifugasi, dan pembentukan sistem dua fase berair diperoleh karakteristik dengan protein total sebesar 4,9 ± 0,01 mg/ml, aktifitas total 20,9 ± 0,57 U/ml, dan aktifitas spesifik 4,3 ± 0,11 U/mg. Hasil studi reaksi enzimatik peroksidase lobak putih (Raphanus sativus L.) terhadap senyawa obat terpilih menghasilkan perubahan warna dari tidak berwarna menjadi warna merah dengan intensitas warna merah yang bervarias. Berdasarkan seluruh hasil tahapan penelitian yang telah dilakukan ini menunjukkan bahwa reaksi berbasis enzimatik peroksidase berpotensi dikembangkan untuk senyawa obat yang mengandung fenol. Kata kunci: analisis obat, spektrofotometri, reaksi kopling, reaksi trinder, peroksidase ii ABSTRACT PRELIMINARY STUDY ON THE DEVELOPMENT OF UV - VISIBLE SPECTROPHOTOMETRY BASED ON THE ENZYMATIC REACTION OF WHITE RADISH (Raphanus sativus L.) PEROXIDASE FOR DRUG ANALYSIS By Sherin Anindhia Maharani NIM: 20721308 (Master’s Program in Pharmacy) The analysis of drugs has played an important role in quality control and assurance. Spectrophotometry has been a common method for identifying and measuring compounds in an analysis. The presence of chromophores in a compound has been a requirement for analysis using spectrophotometric methods. Derivatization with the peroxidase enzymatic reaction has been a method that can be used to modify compounds without chromophores. One example is the oxidation of phenol groups by hydrogen peroxide (H₂O₂) in the presence of 4-aminoantipyrine (4-AAP) catalyzed by the enzyme peroxidase, resulting in a quinoneimine that forms a colored product. The aim of this research has been to develop the peroxidase enzymatic reaction for the analysis of drug compounds containing phenol groups. This research has begun with the selection of drug compounds in the Indonesian Pharmacopoeia 6 th Edition that contain phenol groups based on Emerson's criteria, followed by the preparation of peroxidase enzyme solutions from white radish (Raphanus sativus L.), and the study of enzymatic reactions of the selected drug compounds. The results of the selection of drug compounds containing phenols in the Indonesian Pharmacopoeia 6 th Edition have identified 20 drug compounds that meet Emerson's criteria. The isolation of the peroxidase enzyme from white radish (Raphanus sativus L.) using a combination of homogenization, sonication, filtration, centrifugation, and aqueous two-phase system formation methods has resulted in characteristics with a total protein of 4.9 ± 0.01 mg/ml, total activity of 20.9 ± 0.57 U/ml, and specific activity of 4.3 ± 0.11 U/mg.