JESSICA KLONING GEN FEREDOKSIN, FLAVODOKSIN, DAN FEREDOKSIN (FLAVODOKSIN) REDUKTASE DALAM VEKTOR EKSPRESI pET16b PROGRAM STUDI SAINS DAN TEKNOLOGI FARMASI SEKOLAH FARMASI INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2023 ABSTRAK Dalam rangka meningkatkan dan mempercepat produksi artemisinin, dilakukan upaya produksi artemisinin serta terpenoid lain secara semisintetik dengan menyertakan pendekatan rekayasa genetika pada mikroba menjadi satu alternatif produksi yang berkelanjutan. Promiskuitas amorfadiena sintase memungkinkan enzim tersebut untuk menggunakan farnesil terhidroksilasi (12-OH FPP) sebagai substrat untuk menghasilkan aldehida artemisinat. Hal tersebut dapat mempersingkat tahapan biosintesis artemisinin. Diketahui CYP124 Mycobacterium tuberculosis memiliki kemampuan mengkatalisis reaksi ω-hidroksilasi pada FPP. Namun, aktivitas CYP124 memerlukan protein pembawa dan transfer elektron dari NADPH/NADH, yaitu feredoksin atau flavodoksin, dan feredoksin (flavodoksin) reduktase. Penelitian ini dilakukan dalam rangka mengkloning gen yang mengkode ketiga protein tersebut dan disisipkan pada vektor ekspresi pET16b melalui metode QuickStep-Cloning dan Circular Polymerase Extension Cloning (CPEC). Kloning gen menggunakan QuickStep-Cloning belum berhasil dilakukan karena belum mendapatkan ssDNA dari hasil PCR asimetri. Kloning gen menggunakan metode CPEC berhasil ditransformasikan dalam sel kompeten Escherichia coli DH5α. Keberhasilan kloning dikonfirmasi melalui PCR koloni, analisis restriksi dan analisis urutan DNA. Gen fpr telah berhasil disisipkan ke dalam pET16b. Tahapan penelitian dilanjutkan dengan percobaan ekspresi protein pada suhu 37 o C dengan induksi IPTG dan tanpa induksi IPTG. Kata kunci: Feredoksin, flavodoksin, feredoksin (flavodoksin) reduktase, CPEC, Quickstep ABSTRACT In order to improve the production of artemisinin, efforts were made to produce artemisinin and other terpenoids semisynthetically by incorporating microbial genetic engineering as an alternative for sustainable production. The promiscuity of amorphadiene synthase allows the enzyme to utilize hydroxylated farnesyl (12-OH FPP) as a substrate to produce artemisinic aldehyde. This process led to a shortened artemisinin biosynthesis pathway. CYP124 protein from Mycobacterium tuberculosis is known to have the ability to catalyze ω-hydroxylation reaction on FPP.