18 3 Metode Penelitian 3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat yang digunakan Penelitian dilakukan di Laboratorium Biokimia serta Laboratorium Kimia Analitik Program Studi Kimia ITB. Alat yang digunakan adalah peralatan gelas standar laboratorium, ruang 4 o C, pH-meter, magnetic stirrer, sentrifuga dingin (Beckman), pipet mikro ukuran 0,5-10 μL, 10-100 μL, dan 100-1000 μL (Effendorf, Germany), spektrofotometer UV/Vis (Spectronic 20), kuvet plastik, peralatan elektroforesis (Biorad, seri 525 BR), sentrifuga spin , vortex, oven 37 o C, Plat KLT, Chamber KLT. Semua alat yang digunakan dipinjam dari gudang alat Laboratorium Biokimia Program Studi Kimia ITB, kecuali pH-meter yang dipinjam dari Laboratorium Kromatografi Kimia Analitik Program Studi Kimia ITB. 3.1.2 Bahan yang digunakan Bahan yang digunakan berderajat pro analisis kecuali disebutkan lain. Sampel Ubi Cilembu diperoleh dari kios di jalan Setiabudi, Bandung, sedangkan bahan lainnya diperoleh dari gudang bahan Program Studi Kimia ITB. Bahan-bahan yang digunakan adalah CH 3COONa (Merck), asam asetat glasial (Merck), β- merkaptoetanol (Merck), ammonium sulfat (Merck), Na-K-tartrat.4H 2O (Merck), Na 2SO4 (Merck), CuSO4.5H2O (Merck), BSA, H2SO4 pekat, Na2HAsO4.7H2O (Merck), (NH 4)6Mo7O24.4H2O (Merck), Na2CO3 (Merck), NaHCO3 (Merck), maltosa (Merck), marker protein, akrilamid, bis-akrilamid, basa tris, N,N,N’,N’- tetrametilendiamin (TEMED), amonium persulfat (APS), metanol (Merck), 19 gliserol (Merck), butanol, etanol, glisin (Merck), bromofenol biru (Merck), coomasie biru, alumunium foil, aqua dm, dan aquades. 3.2 Pembuatan Bahan Dalam penelitian ini ada beberapa bahan yang harus dipersiapkan terlebih dahulu. Namun adapula yang harus dibuat segar sebelum memulai penelitian. 3.2.1 Pembuatan Larutan Pati Larutan Pati dibuat dengan konsentrasi 1 mg/mL. Larutan ini digunakan pada metode Reverse Zymography. Sebanyak 0,01 g pati dalam gelas kimia 100 mL kemudian ditambahkan dengan 10 mL 0,016 M buffer Na-Asetat pH 4,8. Setelah itu dipanaskan lalu didinginkan pada suhu ruang. 3.2.2 Pembuatan Standar Maltosa Larutan standar Maltosa yang digunakan mempunyai konsentrasi 100 μg/mL. 0,01 g maltosa ke dalam gelas kimia 100 mL. Kemudian dilarutkan dengan larutan buffer Na-Asetat pH 4,8 pada labu takar 100 mL sampai tanda batas. Larutan disimpan pada botol gelap bertutup dan ditempatkan pada suhu ruang 4 o C. 3.2.3 Pembuatan Larutan Arseno Molibdat Reagen Arseno Molibdat dibuat dengan mencampurkan Larutan A dan B dalam labu ukur 100 mL, sampai tanda batas. A. Larutan A dibuat dengan menambahkan 5 g (NH 4)6Mo7O24.4H2O ke dalam gelas kimia 100 mL. Kemudian ditambahkan aquades dan 4,2 mL H 2SO4 pekat.