Transformasi Saccharomyces cerevisiae dengan Plasmid YEp-Secretex-BGL1 Pembawa Gen ß-Glukosidase Trichoderma reesei Transformation of Saccharomyces cerevisiae with YEp-Secretex-BGL1 Plasmid Containing Trichoderma reesei -Glucosidase Gen SKRIPSI MARCELL SINAY NIM 10505078 PROGRAM STUDI KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2009 Abstract Bioethanol produced from cellulose-based material is a promising alternative biofuel. Production of biofuel from cellulose involves two steps, namely conversion of cellulose by enzyme or chemical treatment, and then followed by fermentation of glucose into ethanol by yeast or bacterium. Saccharomyces cerevisiae can be transformed into cellulose utilizing yeast by introduction of genes encoding cellulases system. ß-Glukosidase (BGL) is one of cellulase multienzyme system. It hydrolyzes ß-D-(1,4) glycosidic bond of cellobiose to produce glucose. In this study, Eschericia coli and S. cerevisiae were transformed with an expression vector YEp-Secretex containing gene encoding BGL1 (YEp-BGL1). Recombinant plasmids were isolated and were confirmed by restriction analysis using XbaI and NdeI. Culture supernatant of S. cerevisiae harboring YEp-BGL1 showed ß-glukosidase activity at temperature of 50ºC and pH 7.0. Keywords : ß-Glukosidase, Saccharomyces cerevisiae, cellulose iii Abstrak Bioetanol yang dihasilkan dari biomassa berbahan dasar selulosa merupakan sumber bahan bakar alternatif yang menjanjikan. Produksi biofuel dari selulosa melibatkan 2 tahap, yaitu konversi selulosa menjadi glukosa secara enzimatis atau kimiawi, diikuti oleh fermentasi glukosa.menjadi etanol oleh ragi atau bakteri. Saccharomyces cerevisiae dapat ditransformasikan menjadi ragi yang dapat mengolah selulosa dengan memasukkan gen pengkode selulase. ß-Glukosidase (BGL) adalah salah satu enzim dari sistem multienzim selulase. ß-Glukosidase menghidrolisis ikatan ß-D-(1,4) glikosidik pada selobiosa menghasilkan glukosa. Dalam penelitian ini, Eschericia coli TOP10 dan S. cerevisiae ditransformasikan dengan plasmid YEp-Secretex yang mengandung gen BGL1 (YEp-BGL1). Plasmid rekombinan diisolasi dari E. coli transforman dan dilakukan analisis restriksi menggunakan XbaI dan NdeI. Kultur supernatan dari S.