Path: Top > S1-Final Project > Pharmacy > 2017

PENGARUH PROTEIN X MUTAN T118N VIRUS HEPATITIS B TERHADAP EKSPRESI Bax PADA SEL HEPG2 SEBAGAI DASAR USULAN KONSELING

Undergraduate Theses from JBPTITBPP / 2018-03-08 08:32:55
Oleh : VINCENTIA NIA ARIN PRASETYO (NIM : 10713034), S1 - Pharmaceutical Science and Technology-SF
Dibuat : 2017-09-29, dengan 1 file

Keyword : Bcl-2, HBx T118N, karsinoma hati, qPCR, virus Hepatitis B

Infeksi Hepatitis B disebabkan oleh virus Hepatitis B (VHB), yang merupakan anggota dari famili Hepadnaviridae. Infeksi VHB kronis dapat berkembang menjadi karsinoma hati,salah satunya akibat keberadaan protein X VHB (HBx). Beberapa mutan HBx diketahui berasosiasi dengan terjadinya karsinoma hati, contohnya HBx K130M/V131I. Di Indonesia ditemukan HBx T118N dengan frekuensi yang hampir sama dengan HBx K130M/V131I.Pada penelitian sebelumnya telah diteliti bahwa HBx T118N dan K130M/V131I menurunkan pembentukan koloni sel HepG2. Penelitian ini bertujuan untuk melihat pengaruh HBx T118N terhadap ekspresi B-cell lymphoma 2 (Bcl-2) pada sel HepG2 menggunakan metode quantitative polymerase chain reaction (qPCR). Penelitian diawali perancangan primer Bcl-2 dan hasil analisis primer secara in silico menunjukkan nilai PRaTo -3. Uji spesifisitas menunjukkan satu puncak pada kurva leleh qPCR. Pengujian efisiensi qPCR dengan primer yang dirancang menghasilkan nilai efisiensi 2,072. Plasmid yang membawa gen pengkode HBx wild type dan mutan diisolasi dan dikonfirmasi kebenarannya menggunakan analisis migrasi, restriksi, dan penentuan urutan nukleotida. Sel HepG2 ditransfeksi dengan plasmid tersebut selama 48 jam dan diisolasi RNA totalnya. RNA total ditranskripsi balik menjadi cDNA yang digunakan sebagai cetakan qPCR. Perubahan ekspresi Bcl-2 ditentukan menggunakan metode kuantifikasi relatif Pfaffl. Keberadaan HBx T118N menurunkan ekspresi Bcl-2 dan perubahannya sejalan dengan penurunan ekspresi Bcl-2 akibat HBx K130M/V131I.

Deskripsi Alternatif :

Hepatitis B virus (HBV) belongs to Hepadnaviridae family and caused Hepatitis B infection. HBV infection can develop into liver carcinoma, one of which is due to presence of HBV X protein (HBx). Some mutations are known to be associated with development of liver carcinoma, for instance HBx K130M/V131I. In Indonesia, HBx T118N has been found at similar frequency as the HBx K130M/V131I. In previous studies, HBx T118N and K130M /V131I decreased the colony formation of HepG2. This study aims to examine the effect of T118N mutant HBx on B-cell lymphoma 2 (Bcl-2) expression in HepG2 cells using quantitative polymerase chain reaction (qPCR). First, Bcl-2 primer pair was designed, then analysed in silico using PRaTo and yielded value of -3. The primer specificity test showed single peak in qPCR melt curve. The qPCR efficiency measurement showed an efficiency value of 2.072. The plasmids containing gene encoding for wild type and mutant HBx were isolated and confirmed by migration analysis, restriction digest analysis, and nucleotide sequencing. HepG2 cells were transfected with the plasmids for 48 hours and the total RNA was isolated. The total RNA was reverse-transcribed into cDNA and used as a qPCR template. The level of Bcl-2 expression were determined using the relative quantification method Pfaffl. The presence of HBx T118N decreased Bcl-2 expression and the change was in line with the effect of HBx K130M/V131I.


Copyrights : Copyright (c) 2001 by Perpustakaan Digital ITB. Verbatim copying and distribution of this entire article is permitted by author in any medium, provided this notice is preserved.

Beri Komentar ?#(0) | Bookmark

PropertiNilai Properti
ID PublisherJBPTITBPP
OrganisasiS
Nama KontakUPT Perpustakaan ITB
AlamatJl. Ganesha 10
KotaBandung
DaerahJawa Barat
NegaraIndonesia
Telepon62-22-2509118, 2500089
Fax62-22-2500089
E-mail Administratordigilib@lib.itb.ac.id
E-mail CKOinfo@lib.itb.ac.id

Print ...

Kontributor...

  • Pembimbing : Dr. rer. nat. Aluicia Anita Artarini ; Debbie S. Retnoningrum, Ph. D, Editor: yana mulyana

File PDF...