Path: Top Member aep@unix.lib.itb.ac.id

PEMBUATAN PUSTAKA GENOM Bacillus subtillis
BAC4 MENGGUNAKAN VEKTOR PLASMID pBR322 dan SFL INANG Escherichia coli DH5a

/
Oleh : M. Setyarini, BIDANG KIMIA ORGANIK, PROGRAM MAGISTER KIMIA
Dibuat : , dengan 0 file

Keyword : Bacillus subtilis, Escherichia coli, genomic library
Nomor Panggil (DDC) : T 547 SET

Penisilin G asilase (PGA) adalah suatu enzim yang secara spesifik dapat menghidrolisis benzilpenisilin menghasilkan asam-6-minopenisilanat (6-APA), suatu bahan dasar dalam pembuatan antibiotik penisilin semisintetik. Bakteri strain lokal Bacillus subtilis
BAC4 dapat memproduksi PGA secara ekstrasel, sehingga jenis mikroba ini dapat dimanfaatkan sebagai sumber PGA yang lebih menguntungkan, karena isolasi enzimnya dapat dilakukan dengan lebih mudah. Salah satu pendekatan yang dilakukan dalam upaya mengisolasi gen pga dari Bacillus subtilis BAC4 adalah pembuatan pustaka genom. Dalam penelitian pembuatan pustaka genom Bacillus .subtilis BAC4,telah dilakukan menggunakan vektor pBR322 di daerah resisten
tetrasiklin dengan enzim restriksi Sall dan sel inang E. coli DH5a. Tahap-tahap dalam pembuatan pustaka genom ini meliputi isolasi DNA
kromosom, isolasi DNA plasmid, pemotongan secara parsial DNA kromosom, fnierisasi DNA plasmid menggunakan Sall, dan ligasi oleh enzim T4 DNA fgase. Plasmid rekombinan yang diperoleh digunakan untuk mentransformasi sel E coli DH5a yang telah dibuat kompeten. Skrining plasmid rekombinan dilakukan dengan cara menumbuhkan
koloni transforman pada media padat yang mengandung ampisilin 100 pg/ml, dan pada media padat yang mengandung tetrasiklin 15 4g/ml.
Koloni pembawa plasmid rekombinan, adalah koloni yang hidup pada media padat yang mengandung ampisilin 100 pg/ml, tetapi mati pada media padat yang mengandung tetrasiklin 15 ~Lg/ml. Dari 4458 sel transforman, didapatkan 49 koloni pembawa plasmid rekombinan. Proses ini menghasilkan efisiensi transformasi sebesar 5x104 koloni/pg DNA pBR322 dan frekuensi rekombinasi sekitar 1,1%. Karakterisasi
terhadap 14 koloni pembawa plasmid rekombinan menggunakan enzim restriksi Sall menunjukkan bahwa ukuran DNA sisipan berkisar antara
0,9-10,3 kb. Meskipun pustaka genom ini telah berhasil dibuat, tetapi jumlahnya belum representatif untuk menemukan gen pga.

Deskripsi Alternatif :

Penisilin G asilase (PGA) adalah suatu enzim yang secara spesifik dapat menghidrolisis benzilpenisilin menghasilkan asam-6-minopenisilanat (6-APA), suatu bahan dasar dalam pembuatan antibiotik penisilin semisintetik. Bakteri strain lokal Bacillus subtilis
BAC4 dapat memproduksi PGA secara ekstrasel, sehingga jenis mikroba ini dapat dimanfaatkan sebagai sumber PGA yang lebih menguntungkan, karena isolasi enzimnya dapat dilakukan dengan lebih mudah. Salah satu pendekatan yang dilakukan dalam upaya mengisolasi gen pga dari Bacillus subtilis BAC4 adalah pembuatan pustaka genom. Dalam penelitian pembuatan pustaka genom Bacillus .subtilis BAC4,telah dilakukan menggunakan vektor pBR322 di daerah resisten
tetrasiklin dengan enzim restriksi Sall dan sel inang E. coli DH5a. Tahap-tahap dalam pembuatan pustaka genom ini meliputi isolasi DNA
kromosom, isolasi DNA plasmid, pemotongan secara parsial DNA kromosom, fnierisasi DNA plasmid menggunakan Sall, dan ligasi oleh enzim T4 DNA fgase. Plasmid rekombinan yang diperoleh digunakan untuk mentransformasi sel E coli DH5a yang telah dibuat kompeten. Skrining plasmid rekombinan dilakukan dengan cara menumbuhkan
koloni transforman pada media padat yang mengandung ampisilin 100 pg/ml, dan pada media padat yang mengandung tetrasiklin 15 4g/ml.
Koloni pembawa plasmid rekombinan, adalah koloni yang hidup pada media padat yang mengandung ampisilin 100 pg/ml, tetapi mati pada media padat yang mengandung tetrasiklin 15 ~Lg/ml. Dari 4458 sel transforman, didapatkan 49 koloni pembawa plasmid rekombinan. Proses ini menghasilkan efisiensi transformasi sebesar 5x104 koloni/pg DNA pBR322 dan frekuensi rekombinasi sekitar 1,1%. Karakterisasi
terhadap 14 koloni pembawa plasmid rekombinan menggunakan enzim restriksi Sall menunjukkan bahwa ukuran DNA sisipan berkisar antara
0,9-10,3 kb. Meskipun pustaka genom ini telah berhasil dibuat, tetapi jumlahnya belum representatif untuk menemukan gen pga.

Beri Komentar ?#(217) | Bookmark

PropertiNilai Properti
ID Publisher
OrganisasiBIDANG KIMIA ORGANIK, PROGRAM MAGISTER KIMIA
Nama KontakDrs. Mahmudin, SIP.
AlamatJl. Ganesha 10
KotaBandung
DaerahJawa Barat
NegaraIndonesia
Telepon022 2500089
Fax62-22-2500089
E-mail Administratordigilib@lib.itb.ac.id
E-mail CKOdigilib@lib.itb.ac.id

Print ...

Kontributor...

  • Editor: @

Review...