Path: Top S1-Final Project Pharmacy 2008

OVERPRODUKSI DAN PURIFIKASI STREPTOKINASE K59QK386Q, SERTA UJI KESTABILAN TERHADAP PEMOTONGAN OLEH PLASMIN MENGGUNAKAN ANALISIS WESTERN BLOT

Undergraduate Theses from JBPTITBPP / 2009-04-13 15:54:04
Oleh : ANIEK WIDAYANTI (NIM 10704018), S1 - Department of Pharmacy
Dibuat : 2008, dengan 8 file

Keyword : streptokinase, plasmin, western blot

Streptokinase masih merupakan pilihan utama dalam terapi stroke dan infark myokardia akut karena harganya relatif lebih murah dibandingkan senyawa fibrinolitik lain. Waktu paruh streptokinase yang pendek salah satunya diakibatkan pemotongan oleh plasmin yang memotong ikatan peptida setelah lisin. Mutasi kerangka baca terbuka streptokinase pada kodon pengkode asam amino lisin pada posisi 59 dan 386 telah berhasil dilakukan (ska K59Q-K386Q), dan telah berhasil dikloning ke dalam vektor ekspresi pET-32b. Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan streptokinase yang lebih stabil terhadap pemotongan oleh plasmin dan mengembangkan antibodi poliklonal anti-streptokinase untuk keperluan analisis streptokinase secara Western blot. Vektor pET-32b ska K59QK386Q telah behasil ditransformasi ke dalam E. coli BL21 dan telah dilakukan overproduksi Ska mutein 2 dengan induser IPTG 0,5 mM dan waktu inkubasi selama 3 jam. Overproduksi Ska mutein 2 berhasil dilakukan yang ditunjukkan dengan keberadaan pita protein berukuran 64,24 kDa pada gel poliakrilamid. Optimasi pemurnian dilakukan dengan menggunakan konsentrasi imidazol meningkat dan ditentukan konsentrasi Ska mutein 2 murni menggunakan metode Bradford. Pembuatan antibodi poliklonal antistreptokinase telah berhasil dilakukan di kelinci galur japanese white selama 30 hari dan telah berhasil dikarakterisasi menggunakan analisis dot blot dan Western blot. Uji stabilitas Ska mutein 2 terhadap pemotongan oleh plasmin dilakukan dengan cara menginkubasi Ska mutein 2 dalam plasma manusia dan dianalisis dengan Western blot. Hasil analisis menunjukkan bahwa selama waktu inkubasi 60 menit Ska mutein 2 dikenali oleh plasmin.

Deskripsi Alternatif :

Streptokinase remains as a drug of choice for stroke and acute myocardial infarction therapy because of low cost compared to other fibrinolytic agents. The short half-life of streptokinase dues to cleavage by plasmin that cleaves peptide bond after lysine residu. Mutations in the open reading frame of streptokinase on codon encoding lysine at residues 59 and 386 were done (ska K59Q-K386Q), and were cloned to an expression vector pET-32b. This research was aimed to produce streptokinase with improved stability to plasmin cleavage and to develop polyclonal antibody anti-streptokinase for analysis of streptokinase using Western blot. Vector pET-32b ska K59Q-K386Q was transformed into E. coli BL21 and was characterized. Overproduction was done using IPTG 0.5 mM as inducer at three hours incubation. Ska mutein 2 was successfully overproduced, confirmed by the presence of a thick band at 64.42 kDa in polyacrylamide gel. Purification of Ska mutein 2 was optimized with various concentrations of imidazole using nickel affinity chromatography and its concentration was determined using Bradford assay. Polyclonal antibody anti-streptokinase was successfully developed in rabbit strain japanese white for 30 days and was analyzed using dot blot and Western blot. Stability assay of Ska 2 mutein was done by incubated Ska 2 mutein with human plasma and was analyzed using Western blot. Stability assay of Ska 2 mutein against plasmin cleavage showed that Ska mutein 2 was recognized by plasmin.

Copyrights : Copyright Â(c) 2001 by ITB Central Library. Verbatim copying and distribution of this entire article is permitted by author in any medium, provided this notice is preserved.

Beri Komentar ?#(0) | Bookmark

PropertiNilai Properti
ID PublisherJBPTITBPP
OrganisasiS
Nama KontakUPT Perpustakaan ITB
AlamatJl. Ganesha 10
KotaBandung
DaerahJawa Barat
NegaraIndonesia
Telepon62-22-2509118, 2500089
Fax62-22-2500089
E-mail Administratordigilib@lib.itb.ac.id
E-mail CKOinfo@lib.itb.ac.id

Print ...

Kontributor...

  • Pembimbing: Dr. Debbie S. Retnoningrum dan Dr. Heni Rachmawati, Editor: Vika A. Kovariansi

Download...